事業分野

β-ヒドロキシステロイド脱水素酵素 β-Hydroxysteroid dehydrogenase 3(or 17)β-Hydroxysteroid:NAD(P)+oxidoreductase [ EC 1.1.1.51 ]

起源

Pseudomonas testosteroni

化学式

図:化学式

形状

凍結乾燥物

比活性

25 units/mg 以上(タンパク質1 mg当りの国際単位)

単位の定義

pH8.9、25℃においてNADの存在下、1分間に基質Testosterone 1μmolを酸化するに要する酵素量を1 unitとする。

保存方法

5℃以下で保存すれば、12ヶ月間活性の低下は殆ど認められない。室温でも少なくとも1週間は安定である。
なお、凍結保存(-20℃)すれば、長期間安定に保存できる。

夾雑酵素

Malate dehydrogenase < 0.01%
Lactate dehydrogenase < 0.01%
Alcohol dehydrogenase < 0.01%
3α-Hydroxysteroid dehydrogenase 約 0.1 %

一般的性質

分子量 約 80,000 Da
至適pH 10.1~10.3
至適温度 34℃
pH安定性 7.0~8.7
熱安定性 42℃以下(pH7.2, 10 min)
Km値 2.5×10-6M (Testosterone)
1.8×10-4M (NAD)

活性測定法

光路 1 cm のキュベット中に100 mM ピロリン酸緩衝液(pH8.9) 1.0 ml、15 mM NAD溶液(pH7.0~7.5) 0.2 ml、蒸留水 1.6 ml、及び酵素液 0.1 ml(約 0.4 unit/ml)を加え、25℃に 平衡化後、3 mM Testosterone-メタノール溶液 0.1 ml を加えて直ちに反応を開始し、対照の蒸留水に対して 340 nmでの初期吸光度増加(反応開始後 30~90秒間の1分間の ΔA340)を読み取り、活性は
計算式:

unit/キュベット = ΔA340/min×3÷6.22
3 = キュベット中の液量(ml)
6.22 = NADHのミリモル分子吸光係数

により算出する。なお、酵素の希釈としては 0.1% Bovine serum albuminを含む緩衝液(30 mM リン酸緩衝液、pH7.2)を使用する。

包装単位

10 units, 50 units

Pickup Contents
バイオケミカル分野
保護アミノ酸及びペプチド合成分野
光学活性化合物の合成分野
有機合成分野
受託合成分野
臨床検査薬分野